4%多聚甲醛对身体有哪些危害
dapi需要移出多聚甲醛嘛?
dapi需要移出多聚甲醛
1)在染色前的细胞密度约是0.8X105/孔(293T细胞/六孔板每孔)。
2)移去完全培养基,用PBS清洗一次。
3)用10%的甲醛溶液或者4%的多聚甲醛PBS在室温固定20分钟。
4)用PBS在室温漂洗三次,每次10分钟。
5)用含0.5%Triton-X-100的PBS在室温通透化处理15分钟。
6)用PBS在室温漂洗三次,每次10分钟。
7)在室温用含10%NGS的PBS封闭1小时,或者在4摄氏度封闭过夜。
8)在37摄氏度用特异性一抗孵育半小时,或者在室温下孵育一小时以上或者4摄氏度孵育过夜。
9)用含0.1% Tween-20的PBS在室温漂洗三次,每次10分钟。
10)用铝箔包裹后在37摄氏度用二抗孵育半小时以上,或者在室温下孵育一小时以上。
11)去除二抗,加入DAPI染色液室温作用15分钟以上。
12)用含0.1% Tween-20的PBS在室温漂洗三次,每次10分钟。
13)在荧光显微镜下观察,用合适波段激发,照相保存实验结果。
使用4%的多聚甲醛可以固定标本不能超过48hours,固定时间太久组织会变脆
如果是在温度4°以下最多可以放一个月,但是肯定会损失抗原的